HSV易從活動病變中被分離，如皰疹液、鼻咽、眼結膜、呼吸道分泌、腦脊液、尿及糞等，組織培養(yǎng)僅需時1～3天。

脫落細胞或皰疹基底刮片細胞學檢查，病變細胞增大，有核內包涵體或呈多核巨細胞改變，雖陽性率可達60%～70%，但陽性改變非單純皰疹病變所特有。近年采用單克隆或多克隆抗體染色，特異性及敏感性均較高。

HSV抗原或DNA檢測，如聚合酶鏈反應（PCR）可快速診斷。血清學檢查對診斷幫助不大，HSV兩型間有交叉免疫反應。

并有肝病變者血清直接膽紅素及轉氨酶增高；腦病變者腦脊液細胞計數增高（包括紅細胞、淋巴及單核細胞），蛋白質增加。但正常者不能除外本病。腦電圖可呈周期性慢波、尖波或多灶性放電，多局限于顳葉。CT腦掃描可見顳葉病變或腦皮質及腦室周圍有低密度改變，部分病例可見出血或鈣化灶。

B超、CT或腦電圖檢查常顯示顱內顳葉局灶性病變；肺部X線多表現為間質性或網狀顆粒狀病變。