超碰最新剧情分类三级|日韩午夜福利视频|日本成人动漫视频|国产亚洲AV无码成人片|日韩成人一级黄色A片日批片|久久一婷婷av美日韩一级|超碰av无码亚州XX站|91亚洲成人视频|在线观看av导航|男人成人大片最近av在线

家庭醫(yī)生在線首頁 > 婦產(chǎn) > 婦科疾病 > 宮頸疾病 > 宮頸炎 > 正文

宮頸濕疣應該做哪些檢查

2017-04-28 11:21:15      

宮頸濕疣應該做以下檢查:

一、醋酸白試驗

用3-5%醋酸外涂疣體2-5分鐘病灶部位變白稍隆起,肛門病損可能需要15分鐘。本試驗的原理是蛋白質(zhì)與酸凝固變白的結(jié)果HPV感染細胞產(chǎn)生的角蛋白與正常的未感染上皮細胞產(chǎn)生的不同,只有前者才能被醋酸脫色。

醋酸白試驗檢測HPV的敏感性很高它比常規(guī)檢測觀察組織學變化還好。但偶爾在上皮增厚或外傷擦破病例中出現(xiàn)假陽性、假陽性變白跡象顯得界限不清和不規(guī)則美國CDC提示,醋酸白試驗并不是特異試驗,且假陽性較常見

二、免疫組織學檢查

常用過氧化物酶抗過氧化物酶方法(即PAP)顯示濕疣內(nèi)的病毒蛋白,以證明疣損害中有病毒抗原。HPV蛋白陽性時尖銳濕疣的淺表上皮細胞內(nèi)可出現(xiàn)淡紅色的弱陽性反應。

三、組織化學檢查

取少量病損組織制成涂片用特異抗人類乳頭瘤病毒的抗體作染色。如病損中有病毒抗原,則抗原抗體結(jié)合在過氧化物酶抗過氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成紅色。此法特異性強且較迅速對診斷有幫助。

四、病理檢查

主要為角化不全棘層高度肥厚,乳頭瘤樣增生,表皮突增厚延長,其增生程度可似假性上皮瘤樣。刺細胞和基底細胞并有相當數(shù)量的核分裂頗似癌變。但細胞排列規(guī)則,且增生上皮和真皮之間界限清楚其特點為粒層和刺層上部細胞有明顯的空泡形成。此種空泡細胞較正常大,胞漿著色淡中央有大而圓,深嗜堿性的核。通常真皮水腫毛細血管擴張以及周圍較致密的慢性炎性浸潤。Bushke-loewenstein巨大型尖銳濕疣,表皮極度向下生長代替了其下面的組織、易與鱗狀細胞相混,故須多次活檢若有緩慢發(fā)展之傾向, 則為一種低度惡變的過程,即所謂疣狀癌。

五、基因診斷

迄今HPV難于用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)及血清學技術檢測,主要實驗診斷技術是核酸雜交。近年來發(fā)展的PCR方法具有特異敏感、簡便、快速等優(yōu)點為HPV檢測開辟了新途徑。

(一)標本的采集及處理

1、標本的采集和預處理:用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞在作細胞學檢查的同時,將標本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS離心(3000g10min)洗滌2次,沉積細胞重懸于1mlPBS中,取0.5ml細胞懸液抽提DNA

2、標本核酸的提取:按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液(10mmol/L Tris-HClpH 7.4,10mmol/L EDTA,150mmol/L NaCl0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下處理過夜;且等體積酚/氯仿(1:1),氯仿/異戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10體積3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍體積無水乙醇置-20℃ 2h或過夜沉淀DNA;加1體積乙醇洗滌1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HClpH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃溫育30min。

(二)PCR擴增

1、引物設計和合成:HPV基因組可分為早期區(qū)(E)和晚期區(qū)(L)每區(qū)含一系列開放讀碼框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非編碼區(qū)及E1E6、E7和L1區(qū)均有保守序列。Manos等從HPVL1區(qū)中選擇保守序列設計合成引物MY11和MY09見表1該引物與HPV 6、11、1618及33型有互補序列,也可擴增其它型HPV。

2、PCR反應試劑:Taq DNA聚合酶(2U/ml)10mmol/L dNTP貯備液(dATP、dCTP、dGTPdTTP各10mmol/L),10×PCR緩沖液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09貯備液滅菌的玻璃蒸餾器制備的蒸餾水。

3、PCR擴增方法和程序:以100μl PCR反應液,用無菌0.5ml硅化塑料離心管為反應管進行擴增反應。

(1)實驗前配制預混反應試劑并分裝預混反應試劑包括除標本DNA外的其它各種PCR反應試劑。每支反應管中含有的PCR反應試劑見表3。

(2)各反應管依次加入10μl標本和90μl預混反應試劑。

(3)加入80-100μl石蠟油在臺式離心機上快速離心數(shù)秒鐘,使各反應試劑收集于油層下。目前PCR試劑已商品化,反應體積為25μl。使用時只加入標本DNA即可。

(4)將反應管置PCR擴增儀上循環(huán)參數(shù)為95℃ 30s,55℃ 40s,72℃ 50s循環(huán)35次最后72℃延伸5min。

4、每次試驗應設陽性及陰性對照以載有HPV的重組質(zhì)粒(每反應為100pg)或含有HPV的細胞系(如Caski、HeLa)DNA為陽性對照,以無HPV的人細胞系DNA為陰性對照

(三)擴增產(chǎn)物的檢測和分析

1、 凝膠電泳:擴增反應結(jié)束后取出反應管,冷卻至室溫,取10μl擴增產(chǎn)物用5%-7%聚丙烯酰胺凝膠或1.5%瓊脂糖電泳溴化乙錠染色,紫外分析儀下分析結(jié)果,分子量約為450bp處出現(xiàn)明顯的DNA帶。

2、 核酸雜交:如果凝膠電泳無清楚的DNA或需確定DNA帶的特異性時可用標記的公用混合探針和(或)型特異探針作Southern吸印雜交、斑點雜交驗證。

按照標準方法制32P ATP標記的寡核苷酸探針需達到約107cpm/pmol特異活性。雜交液中需含有2×106-5×106cpm探針/ml。在55℃緩慢振蕩下雜交2-3h隨后于30-55℃下用洗滌液(2×SSC、0.1%SDS)迅速沖洗雜交膜,除去多余探針然后進行洗膜,其條件依所用探針而異:公用混合探針,55℃洗膜10min;MY12MY13及MY16探針,56-57℃下10 min,并換液重洗1次;MY14及WD74探針58-59℃下10min,亦換液重洗1次。

用PCR方法檢測HPV比核酸雜交方法優(yōu)越其敏感性高,GP-PCR方法以凝膠電泳直接分析結(jié)果,可檢出標本中200個拷貝的HPV DNA若以核酸雜交檢測PCR產(chǎn)物,敏感性提高,能檢出10個拷貝的HPV DNA鑒于PCR技術的高度敏感性以生殖道脫落細胞為檢材足以滿足試驗要求,避免了活檢取材、研磨組織繁雜操作一般情況下,PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳,觀察產(chǎn)生的DNA可直接作出診斷因此,PCR技術檢測HPV實驗周期短、簡便快速。

宮頸疾病不及時治療容易形成宮頸癌變,在發(fā)現(xiàn)宮頸疾病時應及時到醫(yī)院檢查,及時治療。

(責任編輯:陳曉 )

相關文章推薦

    科大夫掛號引導

    合作醫(yī)生

    健康科普