近日，中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院駱衍新、禹匯川團(tuán)隊(duì)研發(fā)的表觀遺傳學(xué)技術(shù)CD8+ MeTIL在英國(guó)腫瘤免疫治療學(xué)會(huì)會(huì)刊Journal for ImmunoTherapy of Cancer（JITC，IF=13.7）發(fā)表。這項(xiàng)技術(shù)可以精確地定量評(píng)估腫瘤微環(huán)境中CD8+ T細(xì)胞的浸潤(rùn)豐度，為腫瘤微環(huán)境的研究領(lǐng)域提供了一種重要的定量觀測(cè)工具，在腫瘤免疫治療中具有重要的臨床意義。本研究由該院結(jié)直腸肛門外科和胃腸病學(xué)研究所團(tuán)隊(duì)牽頭，美國(guó)華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)中心、梅奧診所、加拿大多倫多大學(xué)和澳大利亞墨爾本大學(xué)協(xié)作完成。其中，文章題為“DNA methylation-based signature of CD8+ tumor-infiltrating lymphocytes enables evaluation of immune response and prognosis in colorectal cancer”（腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+淋巴細(xì)胞的DNA甲基化圖譜可用于評(píng)估結(jié)直腸癌的免疫反應(yīng)和治療結(jié)局），該院禹匯川助理研究員和駱衍新主任醫(yī)師為論文通訊作者，鄒齊博士、王小琳助理研究員和任東林教授為論文第一作者。

結(jié)直腸癌是全球腫瘤相關(guān)死亡的主要原因之一，治療方法通常包括手術(shù)切除、放化療、靶向治療以及各種免疫療法。然而，對(duì)這些治療的反應(yīng)在患者之間是不同的。例如，PD-1 等免疫檢查點(diǎn)抑制劑療法在腫瘤治療中取得了進(jìn)展，但很多患者要么沒(méi)有反應(yīng)，要么產(chǎn)生耐藥性。

腫瘤微環(huán)境中的CD8+ T細(xì)胞的數(shù)量和功能狀態(tài)對(duì)腫瘤的治療效果有巨大影響。了解腫瘤微環(huán)境中的CD8+ T 細(xì)胞數(shù)量可以預(yù)測(cè)治療中腫瘤的免疫應(yīng)答，具有實(shí)際的臨床指導(dǎo)意義。

DNA甲基化為一種可遺傳的DNA化學(xué)修飾，能夠在不改變DNA序列的前提下，產(chǎn)生可遺傳性改變。DNA甲基化的動(dòng)態(tài)改變?cè)贑D8+ T細(xì)胞的分化、成熟和活化中起著關(guān)鍵作用。同時(shí)，DNA甲基化具有組織特異性，在不同組織和器官的細(xì)胞中有所不同，并有可能成為識(shí)別不同細(xì)胞的標(biāo)志物。

中山六院結(jié)直腸外科多學(xué)科診療團(tuán)隊(duì)合照

（其中左起第六位為駱衍新主任醫(yī)師，右起第五位為禹匯川助理研究員）

在這項(xiàng)研究中，團(tuán)隊(duì)成員首先構(gòu)建了CD8+ T細(xì)胞特異的DNA甲基化圖譜，并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了CD8+ MeTIL細(xì)胞分類器。研究團(tuán)隊(duì)在DNA甲基化的基礎(chǔ)和應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)行了多年研究，前期已經(jīng)開發(fā)了一項(xiàng)在單堿基分辨率下檢測(cè)基因組甲基化水平的分子檢測(cè)技術(shù)及其定量系統(tǒng)QASM（Clinical Chemistry 2019）。應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)，通過(guò)三組反應(yīng)即可快速實(shí)現(xiàn)CD8+ MeTIL的檢測(cè)和腫瘤免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的定量評(píng)估。技術(shù)流程易于標(biāo)準(zhǔn)化，經(jīng)濟(jì)、時(shí)間和人力成本低。多個(gè)臨床中心的腫瘤標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果顯示，CD8+ MeTIL能很好地預(yù)測(cè)腫瘤免疫檢查點(diǎn)阻斷劑治療和腫瘤生存結(jié)局，表現(xiàn)出了臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用的潛力和前景。該院研究團(tuán)隊(duì)基于這項(xiàng)研究申請(qǐng)了國(guó)家發(fā)明專利：用于評(píng)估組織免疫反應(yīng)和診斷預(yù)后的DNA甲基化檢測(cè)試劑盒（202011176816.1）。

圖 CD8+ T細(xì)胞特異的甲基化圖譜

圖 QASM技術(shù)檢測(cè)CD8+ MeTIL原理和流程

CD8+ MeTIL作為一種數(shù)字細(xì)胞分類器，可以在表觀遺傳的水平準(zhǔn)確地定量腫瘤微環(huán)境中的CD8+ T細(xì)胞。與其它組學(xué)數(shù)據(jù)聯(lián)合分析，將有助于理解表觀遺傳在CD8+ T細(xì)胞分化、活化和抗腫瘤免疫中的作用。CD8+ MeTIL作為生物標(biāo)志物，能與免疫組化等技術(shù)互補(bǔ)，應(yīng)用于臨床，為包括免疫治療在內(nèi)的多種治療方法的選擇提供有價(jià)值的信息。

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