（一）標(biāo)本的采集及處理

標(biāo)本的采集和預(yù)處理：用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞。標(biāo)本核酸的提取，按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液37℃下處理過夜；

（二）PCR擴增

1、 引物設(shè)計和合成：HPV基因組可分為早期區(qū)（E）和晚期區(qū)（L），每區(qū)含一系列開放讀碼框架（ORF）。

2、PCR反應(yīng)試劑：Taq DNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/L dNTP貯備液，10×PCR緩沖液，100μmol/L MY11和MY09貯備液，滅菌的玻璃蒸餾器制備的蒸餾水。

3、PCR擴增方法和程序：以100μl PCR反應(yīng)液，用無菌0.5ml硅化塑料離心管為反應(yīng)管進行擴增反應(yīng)。

（三）擴增產(chǎn)物的檢測和分析

1、凝膠電泳：擴增反應(yīng)結(jié)束后，取出反應(yīng)管，冷卻至室溫，取10μl擴增產(chǎn)物用5%-7%聚丙烯酰胺凝膠或1.5%瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色，紫外分析儀下分析結(jié)果，分子量約為450bp處出現(xiàn)明顯的DNA帶。

2、核酸雜交：如果凝膠電泳無清楚的DNA或需確定DNA帶的特異性時，可用標(biāo)記的公用混合探針和（或）型特異探針作Southern吸印雜交、斑點雜交驗證。

用PCR方法檢測HPV比核酸雜交方法優(yōu)越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝膠電泳直接分析結(jié)果，可檢出標(biāo)本中200個拷貝的HPV DNA，若以核酸雜交檢測PCR產(chǎn)物，敏感性提高，能檢出10個拷貝的HPV DNA。

鑒于PCR技術(shù)的高度敏感性，以生殖道脫落細胞為檢材足以滿足試驗要求，避免了活檢取材、研磨組織繁雜操作。一般情況下，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳，觀察產(chǎn)生的DNA可直接作出診斷。因此，PCR技術(shù)檢測HPV實驗周期短、簡便快速。